DBCO-PEG-血藍蛋白（DBCO-PEG-Hemocyanin, KLH）是一種結合了無銅點擊化學、親水連接臂與超高分子量載體蛋白的多功能生物大分子偶聯物。

一、結構與化學特性

DBCO 端：無銅點擊化學基團，能與疊氮基團（Azide）發生應變促進的疊氮-炔環加成反應（SPAAC），反應條件溫和且特異性高。

PEG 連接臂：提供親水性和柔性，增加空間距離，降低空間位阻。同時，PEG化能顯著改善血藍蛋白的水溶性，并減少非特異性吸附。

血藍蛋白（KLH）端：一種來源于海洋軟體動物（如鮑魚、帽貝）的含銅呼吸蛋白。它的核心優勢在于超高分子量（通常在 450 kDa 到 13,000 kDa 之間）和免疫原性：

信號放大與載體作用：巨大的分子骨架可以同時攜帶大量的熒光染料、生物素或半抗原小分子，在免疫學實驗中產生信號放大效應。

豐富的修飾位點：表面含有大量的賴氨酸等活性氨基酸殘基，為 PEG 和 DBCO 的隨機修飾提供了充足的位點。

二、關鍵參數

英文名稱DBCO-PEG-Hemocyanin / DBCO-PEG-KLH

外觀固體粉末或粘稠液體（取決于分子量和PEG鏈長）

溶解性溶于水及多種緩沖液（如 PBS, HEPES）；若含較長PEG鏈，水溶性更佳

分子量高，通常在 450 kDa ~ 13,000 kDa 之間（取決于來源和聚合狀態）

純度通常 ≥95%

儲存條件-20°C，避光、避濕、密封保存，避免反復凍融

三、典型科研應用場景

1.多肽半抗原偶聯、多克隆 / 單克隆抗體制備疊氮修飾多肽半抗原，SPAAC 點擊 DBCO-PEG-KLH，免疫動物，制備靶向多肽、小分子代謝物的特異性抗體。

2.模塊化亞單位疫苗構建疊氮修飾腫瘤抗原肽、病原抗原，共價偶聯 KLH 載體，構建治療性 / 預防性多肽疫苗，用于免疫動物模型。

3.免疫熒光 / 生物正交示蹤探針疊氮熒光染料與 DBCO-PEG-KLH 點擊，構建 KLH 熒光示蹤探針，研究 KLH 在淋巴器官的體內分布、抗原提呈過程。

4.酶催化免疫納米材料利用 KLH 銅中心氧化酶活性，結合 SPAAC 表面修飾，構建催化免疫一體化納米生物材料。

四、實驗操作與儲存規范

儲存條件?：DBCO基團對光、濕氣敏感，血藍蛋白的多亞基結構在高溫、酸堿環境下易發生解聚失活，需避光分裝后在-80℃冷凍密封條件下保存，避免反復凍融，防止DBCO降解或血藍蛋白蛋白變性失活，產品保質期為6個月。

反應禁忌?：體系中嚴禁加入DTT、TCEP等還原劑，這類物質會直接破壞DBCO的環炔結構，同時還原血藍蛋白活性中心的雙核銅離子，導致點擊反應活性與氧氣轉運活性喪失；同時避免在pH<6.0或pH>9.0的酸堿條件下長時間放置，防止血藍蛋白多亞基解聚。

?操作規范?：開蓋前需4℃短暫離心將管壁樣品收集到管底，避免開蓋時樣品損失；所有操作全程在冰浴條件下進行，避免蛋白變性；僅可用于生物醫藥科研場景，嚴禁直接用于人體臨床實驗或作為藥用疫苗原料使用，操作時佩戴防護手套與護目鏡，避免直接接觸皮膚和黏膜。

?推薦反應參數?：DBCO-PEG-血藍蛋白與疊氮底物的推薦摩爾比為5:1，在pH7.4的PBS緩沖液中4℃避光反應6小時即可完成，后續可通過超濾離心去除游離小分子雜質。

結構示意圖

DBCO-水解蠶絲蛋白

DBCO-脫落酸

DBCO-左旋肉堿

DBCO-Polymyxin B

DBCO-維替泊芬

DBCO-隱綠原酸

DBCO-血藍蛋白

DBCO-木瓜蛋白酶

DBCO-乳酸氧化酶

DBCO-牛胰島素

DBCO-大豆分離蛋白

DBCO-C-反應蛋白

DBCO-乳清蛋白

DBCO-角蛋白

DBCO-肌紅蛋白

DBCO-牛血紅蛋白

DBCO-牛纖維蛋白原

DBCO-硫辛酸

DBCO-阿侖膦酸鈉